Hızlı mikrokolonlu DNA ekstraksiyon yöntemi, kan, plazma, tükürük, idrar, hücre kültürleri ve tampondaki herhangi bir hücre peletinden toplam DNA'nın ekstraksiyonu için tasarlanmıştır. İzole edilmiş DNA'nın yüksek saflığı, onun her türlü analiz için kullanılmasına olanak tanır.

izolasyon süresi numune sayısına bağlı olarak 30 ila 45 dakika arasında değişir;

• DNA'nın kolon zarına etkili bir şekilde bağlanması, numuneden en yüksek DNA verimini elde etmenizi sağlar;
• parçalama ve yıkama solüsyonlarının bileşenlerinin optimize edilmiş bileşimi sayesinde yüksek derecede saflaştırma elde edilir;
• diğer sorbent ekstraksiyon yöntemleriyle karşılaştırıldığında yıkama sırasında DNA'nın parçalanması ve kaybının önemli ölçüde azalması;
• elüsyon çözeltisinin hacmini azaltarak DNA'yı konsantre etmek mümkündür;
• Sütunlardan DNA ekstraksiyonu, ilave plastik tüketimini önemli ölçüde azaltır;
• maksimum numune hacmi - 200 ul;
• kit Proteinaz K içerir;
• izole edilen DNA'nın saflığı A260/A280 oranına göre 1.8-1.9'dur;
• Ekstrakte edilen DNA miktarı numunenin türüne ve miktarına bağlıdır. 200 µl kandan DNA verimi ortalama 5-6 µg'dır.

Genomik DNA "DNA-Extran" izolasyonu için reaktif seti

DNA-Extran serisinin genomik DNA'sının izolasyonu için kitler kullanarak, DNA'yı çeşitli biyolojik materyallerden izole edebilirsiniz: kan, bakteri ve hayvan hücresi kültürleri, taze, dondurulmuş veya kurutulmuş hayvan ve bitki dokuları.

• saflaştırma sırasında DNA kaybını ve parçalanmasını en aza indirerek hücrelerden tam DNA ekstraksiyonu;
• izole edilmiş DNA'nın yüksek seviye saflık (oran A260/A280 = 1,8-1,9) ve PCR, kısıtlama sindirimi, hibridizasyon ve diğer çalışmalar için uygun;
• kitler fenol ve kloroform gibi potansiyel olarak tehlikeli bileşenler içermiyor, büyük miktarda plastik gerektirmiyor ve toksik atık üretmiyor.

Manyetik parçacıklar "M-Sorb-Tube" üzerinde DNA ekstraksiyonu için reaktif seti

Balgam, bronş yıkama sıvısı, beyin omurilik sıvısı, eksuda, punktat, biyopsi, idrar, genital sistem akıntısı ve hücre kültürlerinden mikobakteriyel DNA izolasyonu için uyarlanmıştır. Klinik materyalin ön işleme tabi tutulması, mikrobiyolojik çalışmalar için numune hazırlamaya yönelik standart prosedürlere uygun olarak gerçekleştirilir (21 Mart 2003 tarihli Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı'nın 109 No'lu Kararı “Rusya Federasyonu'nda tüberkülozla mücadele önlemlerinin iyileştirilmesi hakkında) ”, Ek 11 “Birleşik yöntemler için talimatlar mikrobiyolojik araştırma Tüberkülozun tespit, teşhis ve tedavisinde"). Klinik materyali etkisiz hale getirmek için geliştirdiğimiz etkisizleştirme çözümü A'yı kullanmanızı öneririz.

Solüsyon A, mikobakterileri 12 saat içinde öldürür ve daha ileri analizler (DNA ekstraksiyonu, PCR, vb.) için kullanılabilecek klinik materyali dezenfekte eder. Çözüm A, balgam tedavisi için özel olarak uyarlanmıştır ve tamamen yerini alır standart prosedür NaOH-NALC çözeltisi kullanan olağanüstü mukolizör özelliklere sahiptir. İnaktivasyon Solüsyonu A, standart NaOH-NALC numune hazırlığına kıyasla DNA verimini artırır.

İzolasyon tekniği şunları içerir: guanidin izotiyosiyanat ile DNA lizizi, manyetik parçacıklar üzerinde DNA emilimi, santrifüjleme yoluyla DNA çökeltmesi, yıkama aşamaları ve DNA elüsyonu. DNA'yı diğer mikroorganizmalardan izole etmek için kullanılabilir.

silika jel kaplı manyetik parçacıkların sorbent olarak kullanılması, diğer sorbentlerle karşılaştırıldığında teknolojik olarak daha gelişmiş ve kullanışlı bir formattır ve DNA ekstraksiyon tekniğinin maksimum standardizasyonuna ve otomasyonuna izin verir;

Her test örneğine bir dahili pozitif kontrol (IPC) eklenir; RT-PCR inhibitörlerinin varlığı/yokluğu ve DNA ekstraksiyonunun etkinliği, IPC amplifikasyon reaksiyonuyla belirlenir.

Gıda ürünleri ve gıda ham maddelerinden DNA ekstraksiyonu için reaktif kitleri

“Sorb-GMO-A” ve “Sorb-GMO-B” reaktif kitleri, bitki materyallerinden, gıda ürünlerinden ve yemden DNA ekstraksiyonu için özel olarak tasarlanmıştır. Her iki kit de DNA saflaştırması için silikon sorbent kullanır. “Sorb-GMO-A” parçalayıcı ajan olarak guanidin klorür içerir, “Sorb-GMO-B” bitki bileşenlerinden maksimum DNA verimi sağlayan iyonik bir CTAB deterjanıdır. Ayırt Edici Özellikler Sorb-GMO-A kitinin avantajları, DNA ekstraksiyonunun hızı ve kit ile çalışmayı daha güvenli hale getiren kloroformun bulunmamasıdır.

Su örneklerinden (manyetik parçacıklar üzerinde) DNA ekstraksiyonu için reaktif seti "M-Sorb-Leg"

Legionella DNA'sının izolasyonu için tasarlanmıştır. su kütleleri çevre(soğutma kuleleri, yüzme havuzları, su parkları, sıcak ve soğuk su temin sistemleri). Minimum izole edilmiş Legionella konsantrasyonu, 0,5 litre numune başına 100 hücredir.

“M-Sorb-Leg” kiti iki modifikasyonda üretilmektedir: 1-1000 ml hacmindeki su numuneleri için “M-Sorb-Leg1000” ve hacmi 1000 ml'ye kadar olan su numuneleri için “M-Sorb-Leg1” 1 ml. M-Sorb-Leg1000 seti, polikarbonat filtre kullanılarak suyun filtrelenmesini sağlar.

M-Sorb-Leg reaktif seti, aşırı derecede kirlenmiş su örneklerinde bulunan PCR inhibitörlerinden kurtulmanızı sağlar;

• DNA izolasyon tekniği, DNA'nın silika jel kaplı manyetik parçacıklar üzerinde emilmesi ve ardından çökeltici bir reaktifle çökeltilmesi esasına dayanır. Sorpsiyon yöntemlerinin ve toplam çöktürme yönteminin avantajlarını birleştirir;
• Her test örneğine bir dahili pozitif kontrol (IPC) eklenir; RT-PCR inhibitörlerinin varlığı/yokluğu, IPC amplifikasyon reaksiyonuyla belirlenir.

Çevresel nesnelerden (manyetik parçacıklar üzerinde) DNA ekstraksiyonu için reaktif seti "M-Sorb-OOM"

M-Sorb-OOM reaktif seti, özellikle tehlikeli mikroorganizmalar (DOM) ile enfekte olduğundan şüphelenilen çevresel nesnelerden (toprak, su, hayvan cesetleri vb.) DNA'nın izolasyonu ve bunları sonraki analizlere hazırlamak amacıyla tasarlanmıştır. RT-PCR. İzolasyon prosedürü M-Sorb-Leg kiti için açıklanan prosedüre benzer.

RNA izolasyonu "RNA-Extran" için reaktif seti

Kit, RNA'yı kandan, doku parçalarından ve hücre kültürlerinden izole etmek için tasarlanmıştır. RNA-Extran kiti kullanılarak elde edilen RNA, hem RT-PCR hem de hibridizasyon analizi, in vitro çeviri ve klonlama için kullanılabilir.

RNA izolasyonunun prensibi, Khomchinsky'ye göre sulu fazda yalnızca RNA'nın kaldığı ve proteinlerle kompleks halindeki DNA'nın organik faza geçtiği asidik fenolik ekstraksiyona dayanmaktadır. Guanidin tiyosiyanat, hücresel nükleazlar için izolasyon ve denatüre edici bir madde olarak kullanılır.

DNA safsızlıklarından arınmış, yüksek oranda saflaştırılmış RNA elde etmenizi sağlar;

tam kandan, doku parçalarından ve hücre kültürlerinden RNA'nın tamamen ekstraksiyonunu sağlar;

hasarsız RNA elde etmenizi sağlar;

• RNA izolasyon süresi - 1 saat.

katalog numarası	İsim	reaksiyon sayısı
EX-509	Tam kandan genomik DNA izolasyonu için “DNA-Extran-1” reaktif seti	100
EX-511	Hayvan ve insan dokularından DNA ekstraksiyonu için “DNA-Extran-2” reaktif seti	100
EX-512	Bakteri kültürlerinden DNA ekstraksiyonu için “DNA-Extran-3” reaktif seti	100
EX-513	Bitki dokularından DNA ekstraksiyonu için “DNA-Extran-4” reaktif seti	100
EX-514	Kolonlarda toplam DNA izolasyonu için “K-Sorb” reaktif seti (kan, tükürük, idrar, hücre kültürleri, epitelyal hücrelerin kazıntılarından)	100
EX-515	RNA'yı kandan, dokulardan, hücre kültürlerinden izole etmek için "RNA-Extran" reaktif seti	50
OM-505	Klinik örneklerden ve hücre kültürlerinden (manyetik parçacıklar üzerinde) DNA ekstraksiyonu için “M-Sorb-Tub” reaktif seti	50 veya 100
GM-502-50	“SORB-GMO-A” (guanidin + sorbent) Bitki materyalleri ve gıda ürünlerinden DNA ekstraksiyonu için reaktif seti	50
GM-503-50	“SORB-GMO-B” (CTAB+sorbent) Bitki materyalleri ve gıda ürünlerinden DNA ekstraksiyonu için reaktif seti	50
OM-506	1000 ml'ye kadar su örneklerinden Legionella DNA izolasyonu için "M-Sorb-Leg1000" reaktif seti (manyetik parçacıklar için filtreler ayrı olarak sağlanır)	50 veya 100
OM-507	Hacmi 1 ml'ye kadar olan su örneklerinden (manyetik parçacıklarda) Legionella DNA'sının izolasyonu için “M-Sorb-Leg1” reaktif seti	50 veya 100
OOM-502	Çevresel nesnelerden (manyetik parçacıklar üzerinde) DNA ekstraksiyonu için “M-sorb-OOM” reaktif seti	50 veya 100

Sipariş bilgileri

İsim	Hacim	Üretme	Yöntem	Kat.No.
“GDO-MagnoSorb” (guanidin + manyetik sorbent) Bitki materyallerinden ve gıda ürünlerinden DNA ekstraksiyonu için reaktif seti	50 tahsis	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	GM-505-50
“SORB-GMO-A” (guanidin + sorbent) Bitki materyalleri ve gıda ürünlerinden DNA ekstraksiyonu için reaktif seti	50	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	GM-502-50-50
“SORB-GMO-B” (CTAB+sorbent) Bitki materyalleri ve gıda ürünlerinden DNA ekstraksiyonu için reaktif seti	50	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	GM-503-50-50
Mikobakteriyel DNA'nın klinik örneklerden ve kültür hücrelerinden (manyetik parçacıklar üzerinde) izolasyonu için reaktif seti "Amplitub-RV" kit No. 1 ("M-Sorb-Tub")	50	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	OM-505
Tam kandan genomik DNA izolasyonu için “DNA-Extran-1” reaktif seti	100	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	EX-509-100
Hayvan ve insan dokularından DNA ekstraksiyonu için “DNA-Extran-2” reaktif seti	100	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	EX-511
Bakteri kültürlerinden DNA ekstraksiyonu için “DNA-Extran-3” reaktif seti	100	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	EX-512-100
Bitki dokularından DNA ekstraksiyonu için “DNA-Extran-3” reaktif seti	100	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	EX-513-100
Kolonlarda toplam DNA izolasyonu için “K-Sorb” reaktif seti (kan, tükürük, idrar, hücre kültürleri, epitelyal hücrelerin kazıntılarından)	100	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	EX-514-100
	48 reaksiyon	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	GM-443-48
Reaktif seti “Soya / 35S+FMV / NOS taraması”	50 reaksiyon	Synthol	Gerçek zamanlı PCR	GM-416-50

"DNA-sorb-S-M" ® AmpliSens FBUN Rospotrebnadzor Epidemiyoloji Merkezi Araştırma Enstitüsü, Yalnızca araştırma için Rusya Federasyonu, 111123 ve diğer tıbbi olmayan amaçlar, Moskova, ... "

TALİMATLAR

reaktif kitinin kullanımı hakkında

biyolojik materyalden DNA ekstraksiyonu için

"DNA-sorb-S-M"

AmpliSense

FBUN Merkezi Epidemiyoloji Araştırma Enstitüsü

Rospotrebnadzor,

Yalnızca araştırma amaçlıdır

Rusya Federasyonu, 111123,

ve diğer tıbbi olmayan amaçlar

Moskova şehri, Novogireevskaya caddesi, bina 3A

KISALTMALAR LİSTESİ

AMAÇ

YÖNTEMİN PRENSİBİ

DOLDURMA FORMLARI

HAYVANLARDAN BİYOLOJİK MALZEMEDEN DNA EKSTRAKSİYONU................. 8

HAYVAN YEM VEYA BİTKİ HAMMADDELERİ

BASILI ÜRÜNLERDE KULLANILAN SEMBOLLER

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / sayfa 2 / 15

KISALTMALAR LİSTESİ

Bu kılavuzda aşağıdaki kısaltmalar ve semboller kullanılmıştır:

DNA – deoksiribonükleik asit NA – nükleik asitler OK – negatif ekstraksiyon kontrolü NCO – negatif kontrol numunesi PC – pozitif ekstraksiyon kontrolü PKO – pozitif kontrol numunesi PCR – polimeraz zincir reaksiyonu

– Federal bütçe kurumu bilim

FBUN Merkezi Araştırma Enstitüsü

"Epidemiyoloji ve Epidemiyoloji Merkezi Araştırma Enstitüsü" Federal hizmet Tüketici haklarının ve insan refahının korunması için Rospotrebnadzor alanında denetim için

AMAÇ

DNA-sorb-S-M reaktif kiti, hayvanlardan alınan biyolojik materyalden DNA ekstraksiyonu için tasarlanmıştır: doku (biyopsi (genitoüriner sistemin derisi ve mukoza zarları, gastrointestinal sistem, bronşlar), cerrahi ve otopsi) materyali; ve polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılarak daha sonraki araştırmalar için gıdalardan, biyolojik katkı maddelerinden, hayvan yemlerinden veya bitki materyallerinden DNA ekstraksiyonu.

DNA ekstraksiyonu PCR yönteminin bir preanalitik prosedürüdür.

Ekstraksiyon için test numunesinin hacmi: 100 µl (10 ila 100 µl hacimli veya 10 ila 100 mg ağırlığa sahip numunelere izin verilir)1.

DİKKAT! Toplama prosedürü, test materyalinin taşınması ve saklanması koşulları, DNA ekstraksiyonu için hazırlanmasına yönelik ihtiyaç ve prosedürün yanı sıra örnekle ilişkili enterferans maddeleri ve kısıtlamalar hakkında bilgi için amplifikasyon reaktif kitinin talimatlarına bakın. kullanılmış.

YÖNTEMİN PRENSİBİ

Test numunesi2, proteinaz K içeren bir lizis solüsyonu ile muamele edilir; bu, hücre zarlarının tahrip olmasına ve NK ile hücresel bileşenlerin salınmasına neden olur. Çözünmüş NC'ler sorbent parçacıklarına bağlanırken, lize edilmiş test malzemesinin diğer bileşenleri çözelti içinde kalır ve sorbent çökelmesi sırasında çıkarılır. Kullanılan amplifikasyon reaktif kitinin talimatlarına bakın.

Bazı biyolojik materyal türleri bir numune hazırlama adımı gerektirir. Santimetre.

Amplifikasyon için kullanılan reaktif kitinin talimatları.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / sayfa 3 / 15, santrifüjleme ve ardından sorbentin yıkanması yoluyla. Sorbente bir elüsyon tamponu eklendiğinde, NC silika yüzeyinden, santrifüjleme yoluyla sorbent parçacıklarından ayrılan çözeltiye geçer. Bu prosedürün bir sonucu olarak, PCR çalışmasının yüksek analitik hassasiyetini sağlayan, amplifikasyon reaksiyonu inhibitörleri içermeyen, yüksek derecede saflaştırılmış bir NA preparatı elde edilir.

DOLDURMA FORMLARI

Reaktif kiti 2 konfigürasyonda mevcuttur:

Form 1, bir dizi “DNA-sorb-S-M” versiyon 50 reaktifini içerir.

Form 2, bir dizi “DNA-sorb-S-M” versiyon 100 reaktifini içerir.

ÖNLEMLER VE İMHA BİLGİLERİ

Hayvanlardan elde edilen biyolojik materyalleri incelerken, çalışma Rusya Federasyonu Tarım ve Petrol Bakanlığı'nın 27 Ocak 1997 tarih ve 13-7-2/840 sayılı “Teşhis alanında çalışma yürütme kuralları” kurallarına uygun olarak yapılmalıdır. Polimeraz zincir reaksiyonu yöntemini kullanan laboratuvarlar. Veteriner Dairesi tarafından onaylanan Temel Hükümler”.

Gıda ürünleri, biyolojik katkı maddeleri, hayvan yemi veya bitkisel materyaller araştırılırken işin gerekliliklere uygun olarak yapılması gerekmektedir. metodolojik talimatlar MU 1.3.2569-09 “Amplifikasyon yöntemleri kullanılarak laboratuvar çalışmalarının organizasyonu nükleik asitler Patojenite grubu I-IV” ve GOST R 53214-2008 “Gıda ürünleri” mikroorganizmalarını içeren materyallerle çalışırken. Genetiği değiştirilmiş organizmaların ve bunlardan türetilen ürünlerin tespitine yönelik analitik yöntemler.

Genel gereksinimler ve tanımlar."

Çalışırken her zaman yapmalısınız aşağıdaki gereksinimler:

– Laboratuvar süreci tek yönlü olmalıdır. Analiz ayrı odalarda (bölgelerde) gerçekleştirilir. Çalışma Ekstraksiyon Bölgesinde başlamalı ve Amplifikasyon ve Saptama Bölgesinde devam etmelidir. Numuneleri, ekipmanı veya reaktifleri önceki işlem adımının gerçekleştirildiği alana iade etmeyin.

– Kullanılmamış reaktifler, son kullanma tarihi geçmiş reaktiflerin yanı sıra Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / sayfa 4 / 15 kullanılmış reaktifler, ambalajlar3, biyolojik materyal, biyolojik materyalle kirlenmiş materyaller, aletler ve öğeler dahil , SanPiN 2.1.7.2790-10 "Tıbbi atıkların yönetimi için sıhhi ve epidemiyolojik gereklilikler" gerekliliklerine uygun olarak imha edilmelidir.

– Otomatik filtreli pipetlerin tek kullanımlık uçlarını her işlemde kullanın ve değiştirin4. Tek kullanımlık plastik mutfak eşyaları, dezenfeksiyon için kullanılabilecek bir dezenfektan içeren özel bir kaba atılmalıdır. tıbbi atık.

– Numune hazırlamak için kullanılan tabaklar (havan ve havan tokmağı) ve metal aletler (neşter, makas, cımbız, blender aparatları vb.) bir dezenfektan solüsyonunda (örneğin %0,2 dikloroizosiyanürik asit sodyum tuzu solüsyonu) bir saat süreyle bekletilir. yüzey aktif deterjanlı musluk suyuyla yıkandı ve akan ve deiyonize suda yıkandıktan sonra 180 C sıcaklıkta kuru ısıtmalı fırında 4 saat kurutuldu.

– Reaktif kiti, belirtilen sayıda numunenin çalışmasını gerçekleştirmek için tek seferlik kullanıma yöneliktir (bkz. "Bileşim" bölümü).

– Reaktif kiti bu talimatlara göre kullanıma hazırdır.

Reaktif kitini kesinlikle amacına uygun olarak kullanın.

– İç ambalajı hasarlıysa veya reaktif kitini kullanmayın. dış görünüş Reaktif açıklamayla eşleşmiyor.

– Talimatlara göre taşıma ve saklama koşullarına uyulmadığı takdirde reaktif kitini kullanmayın.

Kullanılmamış reaktifler, son kullanma tarihi geçmiş reaktifler, kullanılmış reaktifler, ambalajlar tıbbi atık G tehlike sınıfına aittir.

Filtresiz tek kullanımlık uçlar, ekstraksiyon işlemi sırasında süpernatantı bir vakum aspiratörü kullanarak çıkarmak için kullanılır.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / sayfa 5 / 15

– Reaktif kitini son kullanma tarihinden sonra kullanmayın.

– Numuneler ve reaktiflerle çalışırken tek kullanımlık pudrasız eldivenler, laboratuvar önlükleri ve göz koruması kullanın. İşi bitirdikten sonra ellerinizi iyice yıkayın. Tüm işlemler insan vücudu ile teması önlemek amacıyla sadece eldiven kullanılarak yapılmaktadır.

– Buharlarını solumaktan, cilt, göz ve mukoza ile temasından kaçının, yutmayın. Temas halinde etkilenen bölgeyi derhal suyla yıkayın ve gerekirse tıbbi yardım alın. tıbbi bakım.

– Reaktif güvenlik veri sayfaları (SDS – güvenlik veri sayfası) istek üzerine mevcuttur.

Sonuçlanabilecek olası olayların değerlendirilmesi olumsuz sonuçlar insan vücudu için:

Amacına uygun kullanıldığında ve yukarıdaki önlemlere uyulduğunda insan vücudu ile teması yasaktır.

Şu tarihte: acil durumlar aşağıdakiler mümkündür:

– hassas kişilerde göz mukozasının tahrişi,

– hassas kişilerde cilt tahrişi,

– alerjik reaksiyon,

– solunması halinde zarar verir,

- Ağız yoluyla alındığında zararlıdır.

Reaktif kitinin insan vücudu üzerindeki spesifik etkileri:

– Kanserojen etkisi yoktur.

– Mutajenik etkisi yoktur.

– Üreme toksisitesi yoktur.

EK MALZEME VE EKİPMAN

(üreticileri/tedarikçileri belirtir):

1. 1,5 ve 5,0 mL tek kullanımlık polipropilen vidalı veya sıkı contalı tüpler (örn., Axygen, Inc.

("Exigen, Inc"), ABD veya benzeri).

2. 200 ve 1000 µl'ye kadar filtreli değişken hacimli pipetler için tek kullanımlık uçlar (örneğin, Axygen, Inc., ABD veya benzeri).

3. 200 µl'ye kadar değişken hacimli pipetler için tek kullanımlık uçlar (örneğin, Axygen, Inc., ABD veya benzeri).

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / sayfa 6 / 15

4. 1,5 ml'lik tüpler için raflar (örn. Axygen, Inc., ABD veya benzeri).

5. Laminer akış başlığı, biyolojik güvenlik sınıfı II tip A (örneğin, “BAVp-01-“Laminar-S”-1,2”, JSC “Laminar Systems”, Rusya veya benzeri).

6. 25 ila 100 °C arası Eppendorf tüpleri için termostat (örneğin, SIA Biosan, Letonya veya benzeri).

7. 25 ila 100 °C arasındaki Eppendorf tüpleri için termostat çalkalayıcı (örneğin, TS-100, SIA Biosan, Letonya veya benzeri).

8. Eppendorf tüpleri için mikrosantrifüj maksimum hız en az 12 bin g'lık santrifüj (örneğin MiniSpin, Eppendorf (Eppendorf Manufacturing Corporation), Manufacturing Corporation Almanya veya benzeri).

9. Vortex (örneğin, SIA Biosan, Letonya veya benzeri).

10. Süpernatan sıvıyı çıkarmak için bir tuzak şişesine sahip tıbbi vakum aspiratörü (örneğin, "OM-1", LLC "Utes", Rusya veya benzeri).

11.Otomatik değişken hacimli dağıtıcılar (örneğin, Biohit LLC, Rusya veya benzeri).

12. 2 ila 8 °C arası buzdolabı ve eksi 24 ila eksi 16 C arası dondurucu.

13.MU 1.3.2569-09'a göre ayrı bornoz, şapka, ayakkabı ve tek kullanımlık eldivenler.

14.Tek kullanımlık plastik kaplar Malzemelerin imhası ve inaktivasyonu için.

–  –  –

HAYVANLARDAN BİYOLOJİK MALZEMEDEN DNA EKSTRAKSİYONU

2. Gerekli sayıda vidalı veya sıkı kapaklı 1,5 ml tek kullanımlık polipropilen tüpleri seçin (PCR çalışması için sağlanmışsa negatif ve pozitif ekstraksiyon kontrolleri dahil).

Lizis reaktif tamponu ve yıkama solüsyonu 1'i 2 ila 8°C arasındaki sıcaklıklarda saklarken, kristal formunda bir çökeltinin oluşması mümkündür.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / sayfa 8 / 15

3. Her tüpe 10 µl BKO6 ekleyin (PCR araştırması için sağlanmışsa). Tüplere 400 µl lizis reaktifi tamponu ve 17 µl lizis reaktifi ekleyin.

4. Her numune için filtreli ayrı bir uç kullanarak, hazırlanan tüplere 100 µl test numunesi6 ekleyin.

DİKKAT! Gerekli miktarda test numunesi içeren bir tüpe 400 µl lizis reaktifi tamponu ve 17 µl lizis reaktifi eklenebilir ve buraya 10 µl BKO7 (PCR araştırması için sağlanmışsa) ayrı uçlar kullanılarak eklenebilir. bir filtre.

5. Negatif kontrol (NC) ekstraksiyon tüpüne 100 μl NCO ekleyin, pozitif kontrol (PC) ekstraksiyon tüpüne 90 μl NKO ve 10 μl PCO ekleyin (PCR çalışmaları için ekstraksiyon kontrolleri sağlanmışsa).6

6. Kapakları sıkıca kapatın, iyice karıştırın ve damlaları vorteksleyin.

Tüpleri 1 saat süreyle 64 °C sıcaklıktaki bir termostata yerleştirin ve periyodik olarak vorteksle karıştırın (her 10-12 dakikada 5 kez). 60°C sıcaklıkta 12 saat süreyle inkübasyona izin verilir.

7. Çözünmemiş numune parçacıklarını 10 bin g'de 5 dakika boyunca santrifüjleme yoluyla peletleyin (örneğin, bir MiniSpin mikrosantrifüj için 12 bin rpm, Eppendorf Manufacturing Corporation).

8. Filtreli ayrı uçlar kullanarak 200–350 µl hacimdeki süpernatan sıvıyı çok dikkatli bir şekilde (askıda parçacıklar ve yağ damlacıklarından kaçınarak) alın ve yeni tüplere aktarın. Damlaları girdapla çökeltin.

9. Bir vorteks kullanarak kuvvetlice karıştırarak evrensel sorbenti yeniden süspanse edin. Ayrı bir uçla her tüpe 25 µl yeniden süspanse edilmiş evrensel sorbent ekleyin ve kapakları sıkıca kapatın.

Vorteksle karıştırın, her 2 dakikada bir karıştırarak 10 dakika rafta bırakın.

Test ve kontrol örneklerinin hacmini değiştirmek mümkündür; amplifikasyon için kullanılan reaktif setinin talimatlarına bakın.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / sayfa 9 / 15

18.Aşağıdaki paragraflardaki yıkama işlemini tekrarlayın. 15–16, süpernatantı tamamen çıkarın.

19. Üniversal sorbenti kurutmak için kapakları açık olan test tüplerini 64 °C sıcaklıktaki bir termostata 5-10 dakika boyunca yerleştirin.

20.Tüplere 50–100 µl elüsyon tamponu B ekleyin (kullanılan amplifikasyon reaktif kiti talimatlarına bakın).

Sorbent tamamen yeniden süspansiyon haline gelinceye kadar vorteksle karıştırın. Bir girdap kullanarak periyodik olarak (dakikada bir kez) karıştırarak 5-10 dakika boyunca 64 °C'deki bir termostata yerleştirin.

Saflaştırılmış DNA, 2 ila 8 °C sıcaklıkta bir hafta, eksi 24 ila eksi 16 °C sıcaklıkta 6 ay ve eksi 68 °C'yi aşmayacak sıcaklıkta bir yıl saklanabilir. Bunu yapmak için, sorbenti yakalamadan süpernatan sıvıyı yeni bir test tüpüne aktarmak gerekir.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / sayfa 10 / 15

GIDALARDAN, BİYOLOJİK KATKI MADDELERİNDEN DNA EKSTRAKSİYONU,

HAYVAN YEM VEYA BİTKİ HAMMADDELERİ

DİKKAT! DNA ekstraksiyonu için biyolojik materyal hazırlama prosedürü ve test örneğinin hacmi için kullanılan amplifikasyon reaktif kitinin talimatlarına bakın.

1. Lizis reaktif tamponunu ve yıkama solüsyonu 1'i, eğer 2 ila 8 °C sıcaklıkta saklanmışsa, kristaller tamamen çözünene kadar 64 °C sıcaklıkta ısıtın.

2. Önceden işlenmiş test numuneleri içeren 1,5 ml'lik tüpleri bir raka yerleştirin (numune hacmi/miktarı, kullanılan amplifikasyon reaktif kiti talimatlarına bakın).

3. Negatif ekstraksiyon kontrolü (EC) için vidalı veya sıkı oturan kapaklı 1,5 mL'lik tek kullanımlık polipropilen tüp hazırlayın. Test tüpüne 100 µl OKO ekleyin.

4. Test numuneleri ve TC ile birlikte test tüplerine 400 µl lizis reaktifi tamponu ve 17 µl lizis reaktifi ekleyin.

5. Kapakları sıkıca kapatın, iyice karıştırın ve damlaları vorteksleyin.

Tüpleri 1 saat süreyle 64 °C sıcaklıktaki bir termostata yerleştirin, periyodik olarak vorteksle karıştırın (her 10-12 dakikada 5 kez) veya çalkalayıcı termostat kullanın.

6. Çözünmemiş numune parçacıklarını 10 bin g'de 5 dakika boyunca santrifüjleme yoluyla peletleyin (örneğin, bir MiniSpin mikrosantrifüj için 12 bin rpm, Eppendorf Manufacturing Corporation).

7. Gerekli sayıda vidalı veya sıkı kapaklı yeni 1,5 ml tek kullanımlık polipropilen tüpleri seçin.

8. Bir girdap kullanarak kuvvetlice karıştırarak evrensel sorbenti yeniden süspanse edin. Ayrı bir uçla her tüpe 25 µl yeniden süspanse edilmiş evrensel sorbent ekleyin ve kapakları sıkıca kapatın.

9. Parçalanmış örneklerin bulunduğu tüplerden, filtreli ayrı uçlar kullanarak 200–350 µl hacimdeki süpernatan sıvıyı çok dikkatli bir şekilde (askıda kalan parçacıkların ve yağ damlalarının girmesinden kaçınarak) alın ve sorbent içeren tüplere aktarın. Vorteksle karıştırın, her 2 dakikada bir karıştırarak 10 dakika rafta bırakın.

Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / sayfa 11 / 15

10.Tüpleri bir mikrosantrifüjde 1 dakika boyunca 2 bin g'de santrifüjleyin (örneğin, Eppendorf Manufacturing Corporation MiniSpin mikrosantrifüj için 5 bin rpm).

11. Sorbenti yakalamadan, bir vakum aspiratörü kullanarak, 200 µl filtresiz ayrı bir uçla her bir tüpteki süpernatan sıvıyı çıkarın.

12.Test tüplerine 300 µl yıkama solüsyonu 1 ekleyin, kapakları sıkıca kapatın ve evrensel sorbent tamamen yeniden süspanse olana kadar vorteksleyin.

13.Tüpleri mikrosantrifüjde 2 bin g'de 1 dakika boyunca santrifüj edin.

14. Sorbenti yakalamadan, her bir tüpteki süpernatan sıvıyı, filtresiz ayrı bir 200 µl uçla, bir vakum aspiratörü kullanarak çıkarın.

15.Test tüplerine 500 µl yıkama solüsyonu 2 ekleyin, kapakları sıkıca kapatın ve evrensel sorbent tamamen yeniden süspanse olana kadar vorteksleyin.

16.Tüpleri bir mikrosantrifüjde 7 bin g'de 1 dakika boyunca santrifüjleyin (örneğin, Eppendorf Manufacturing Corporation MiniSpin mikrosantrifüj için 10 bin rpm).

17. Sorbenti yakalamadan, her bir tüpteki süpernatan sıvıyı, filtresiz ayrı bir 200 µl uçla, bir vakum aspiratörü kullanarak çıkarın.

18.Aşağıdaki paragraflardaki yıkama işlemini tekrarlayın. 15-16, süpernatantı tamamen çıkarın.

19. Üniversal sorbenti kurutmak için kapakları açık olan test tüplerini 64 °C sıcaklıktaki bir termostata 5-10 dakika boyunca yerleştirin.

20.Test tüplerine 50 µl elüsyon tamponu B ekleyin. Sorbent tamamen yeniden süspansiyon haline gelinceye kadar vorteksle karıştırın. Bir girdap kullanarak periyodik olarak (dakikada bir kez) karıştırarak 5-10 dakika boyunca 64 °C'deki bir termostata yerleştirin.

21.Tüpleri mikrosantrifüjde 10 bin g'de 1 dakika boyunca santrifüj edin. Süpernatan saflaştırılmış DNA içerir. Örnekler PCR için hazır.

Saflaştırılmış DNA, 2 ila 8 °C sıcaklıkta bir hafta, eksi 24 ila eksi 16 °C sıcaklıkta 6 ay ve Form 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12 sıcaklıkta saklanabilir. /27/16 / sayfa 12 / 15 yıl boyunca sıcaklık eksi 68 °C'den yüksek değil. Bunu yapmak için, sorbenti yakalamadan süpernatan sıvıyı yeni bir test tüpüne aktarmak gerekir.

RAF ÖMRÜ, TAŞIMA VE DEPOLAMA KOŞULLARI.

Tarihten önce en iyisi. 12 ay Süresi dolmuş reaktif kitleri kullanılamaz. Açılmış reaktiflerin son kullanma tarihi, talimatlarda aksi belirtilmediği sürece, açılmamış reaktiflerin etiketlerinde belirtilen son kullanma tarihine karşılık gelir.

Toplu taşıma. Reaktif kiti, her türlü kapalı, soğuk elementler içeren termal kaplarda 5 günden fazla olmamak üzere 2 ila 8 C sıcaklıkta taşınmalıdır. Araçlar. Teslim aldıktan sonra belirtilen saklama sıcaklıklarına uygun olarak parçalarına ayırın.

Depolamak. Reaktif kitini, lizis reaktifi hariç, 2 ila 25 C sıcaklıkta saklayın. Lizis reaktifini buzdolabında 2 ila 8 C sıcaklıkta saklayın.

Soğutma odaları düzenlenmiş sıcaklık koşullarını sağlamalıdır.

Lizis solüsyonu 30 cm3,

Yıkama solüsyonu 1 30 cm3,

Temizleme solüsyonu konsantresi 2 20 cm3,

Sorbent süspansiyonu 2 cm3,

DNA elüsyon tamponu 4 cm3.

Çalıştırma prosedürü:

Kitteki konsantrenin 20 cm3'ünü, 80 cm3 damıtılmış suyu ve 100 cm3 %96'lık etanolü ayrı bir şişede karıştırarak temizleme solüsyonu 2'yi hazırlayın.

Çözeltiyi oda sıcaklığında sıkıca vidalanmış bir şişede saklayın.

Emici maddenin durumunu kontrol edin - çökerken süspansiyonun hacminin yaklaşık yarısını kaplamalıdır.

Sıkıca kapatılmış 1,5 cm3'lük bir polipropilen tüpe (tercihen vidalı kapaklı), 100 µl önceden hazırlanmış test numunesi (negatif veya pozitif numune) ekleyin, 300 µl lizis solüsyonu (ayrı bir uçla her numuneye) ekleyin ve karıştırın 3-10 kez pipetleme yaparak iyice.

15 - 20 µl yeniden süspanse edilmiş sorbent ekleyin, vorteksle iyice karıştırın, sorbentin tamamen çökelmesi için 5-7 dakika boyunca bir tripoda yerleştirin.

300 µl yıkama solüsyonu 1 ekleyin, sorbent tamamen yeniden süspanse olana kadar vorteksle karıştırın (sorbent kötü bir şekilde bozulursa, bir pipetle parçalayın), 30 saniye boyunca 4-8 bin rpm'de bir santrifüjde çökeltin. Ayrı bir uç kullanarak her tüpten süpernatantı toplayın.

800 ul yıkama solüsyonu 2 ekleyin, sorbent tamamen yeniden süspansiyon haline gelinceye kadar vorteksleyin, 6-10 bin rpm'de bir mikrosantrifüjde 30 saniye boyunca çökeltin ve süpernatantı toplayın.

Adım 6'yı tekrarlayın, süpernatantı dikkatlice seçin, sorbent çökeltisini 65 °C'de bir termostatta 5 dakika kurutun.

Sorbenti 30-40 ul elüsyon tamponunda yeniden süspanse edin, 65°C'deki bir termostata 5 dakika yerleştirin, periyodik olarak vorteksle çalkalayın.

1 dakika süreyle maksimum hızda bir mikrosantrifüjde çökelti.

Numune PCR için hazırdır; süpernatan saflaştırılmış DNA içerir.

DNA ekstraksiyon adımı sırasında negatif kontrol olarak tuzlu su veya deiyonize su kullanılması gereklidir.

DNA-sorb-PCR kiti kullanılarak DNA ekstraksiyonunun verimliliği %30 – 60'tır.

Klinik materyal	Plazma, serum	Kazıma, sperm, faringeal yıkama, idrar	Biyopsi, kan, dışkı
Pipetleme sayısı
Emici madde hacmi
Sorbent biriktirme oranı	8 bin rpm	6 bin rpm	3-4 bin rpm
Eluent hacmi
DNA ekstraksiyon verimliliği

5.2. Aşama 2. PCR amplifikasyonu için kitin PCR kompozisyonunun ayarlanması:

5x reaksiyon tamponu 1000 µl (viskoz, şeffaf mavi çözelti)

Deiyonize su.2000 µl

Nükleotidlerin karışımı.500 µl

Taq polimeraz.100 µl

Astar karışımı.500 µl

PCR için mum.2000 µl

Pozitif kontrol: 100 µl

Negatif kontrol 100 ul

Mineral yağ 4000 µl

Kit bir yıl boyunca eksi 20°C'de saklanır.